Comparación de sistemas de cultivo de embriones de alpacas

Manuel Guido Pérez Durand, Juan Pompeyo Zevallos Aragón, Uri Harold Pérez Guerra,

Resumen


Resumen

El presente estudio se llevó a cabo en laboratorio de Reproducción animal de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Nacional del Altiplano Puno-Perú. El objetivo principal fue evaluar el efecto del cultivo in vitro e in vivo de los cigotos de alpacas producidos in vitro. Se utilizaron 226  Complejos cumulus ovocitos (CCOs), que fueron obtenidos de los ovarios procedentes de alpacas beneficiadas en el camal. Los ovarios fueron transportados en solución salina al 0.9% y suplementada con antibióticos. Los CCOs fueron aspirados de folículos de 2 a 6 mm. Los ovocitos fueron madurados en TCM 2520, suplementado con 2.2 mg/mL con bicarbonato de sodio, 0.0028 mg/mL de piruvato de sodio, 10% de suero fetal, 2 U.I./mL de gonadotropina coriónica equina, 10 U.I./mL de gonadotropina  humana más 50 ug/mL de gentamicina y fueron cultivados a 38.5oC, bajo 5% de CO2, y alta humedad por 36 h. La fertilización se realizó en FERT TALP (10 ovocitos/gota). Para el cultivo in vitro se utilizó el SOFaa. Para el cultivo in vivo se utilizó el oviducto de hembras. Los resultados fueron evaluados: A las 120 h de cultivo in vitro post inseminación se observaron 19(17.4%) mórulas y 8 (7.3%) blastocitos y a las 168 h se observaron 18 (16.5%) mórulas y 7(6.4%) blastocitos. Del cultivo in vivo en el oviducto de las alpacas receptoras se recuperaron 3 blastocitos eclosionados, 5 blástulas y 2 blástulas colapsadas. En conclusión, tanto el cultivo in vitro como in vivo de cigotos producidos in vitro pueden ser utilizados en la producción de embriones de alpacas.

Palabras clave: Ovocitos, cigoto, cultivo, embriones, alpaca.

Abstract

The present study was carried out in a laboratory of Animal Reproduction of the Faculty of Veterinary Medicine and Animal Science of the National University of the Puno-Peru Highland. The main objective was to evaluate the effect of in vitro and in vivo culture of alpacas zygotes produced in vitro. We used 226 cumulus oocyte complexes (CCOs), which were obtained from the ovaries from animals that were beneficiated in the camal and transported in 0.9% saline and supplemented with antibiotics. CCOs were aspirated from follicles of 2 to 6 mm. The oocytes were matured in TCM 2520, supplemented with 2.2 mg/mL with sodium bicarbonate, 0.0028 mg/mL sodium pyruvate, 10% fetal serum, 2 IU/mL equine chorionic gonadotropin, 10 IU/mL chorionic gonadotropin Human plus 50 ug/mL gentamicin and were cultured at 38.5 ° C, under 5% CO2, and high humidity for 36 h. Fertilization was performed in FERT TALP (10 oocytes/drop). For the in vitro culture SOFaa was used. In vivo culture was used oviduct of females. The results were: At 120 h of culture in vitro post insemination, 19 (17.4%) morulae and 8 (7.3%) blastocytes were observed and at 168 h, 18 (16.5%) morulae and 7 (6.4%) blastocytes were observed. From the in vivo culture in the oviduct of the receiving alpacas 3 blastocytes hatched, 5 blastulas and 2 collapsed blastulas were recovered. Conclusion The in vitro and in vivo culture of the zygotes produced in vitro is possible to be used for the production of alpaca embryos.

Keywords : oocyte , zygote, culture , embryos, alpaca.

Palabras clave


Ovocitos, cigoto, cultivo, embriones, alpaca.

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Referencias


Arriaga IC, Huanca W, Terreros M, Becerra JJ, García PH, Ampuero A. 2014. Efecto de Temperatura y Tiempo de Almacenamiento de Ovarios de Alpacas sobre la Tasa de Maduración y División in vitro de Ovocitos. RevInvVet Perú 25(4), 477-486.

Coleman NV, Shagiakhmetova GA, Lebedeva IY, Kuzmina TI, Golubev AK. 2007. In vitro maturation and early developmental capacity of bovine oocytes cultured in pure follicular fluid and supplementation with follicular wall. Theriogenology 67, 1053 –1059.

Conde PA, Herrera C, Trasorras VL, Giuliano S, Director A, Miragaya MH, Chaves MG, Sarchi MI, Stivale D, Quintans C, Agüero A, RutterB, Pasqualini S. 2008. In vitro production of llama (Lama glama) embryos by IVF and ICSI with fresh semen. Anim. Reprod. Sci. 109, 298–308.

Del Campo MR, Del Campo CH, Donoso X, Berland M, Mapletoft R. 1994. in vitro fertilization and development of llama (Lama glama) oocytes using epididymal spermatozoa and oviductalcell co-culture. Theriogenology 41, 1219 –1229.

Fernadez-Baca S, Hansel W, Novoa C. 1970. Embryonic mortality in the alpaca. Biol Reprod 3, 243-251.

Huanca W, Condori R, Chileno M, Garcia P, Cainzo J, Becerra JJ. 2014. Evaluación de cuatro tiempos de cultivo sobre la tasa de maduración y división pos fecundación in vitro de ovocitos de alpaca. Rev Inv Vet Peru 25(4), 468-476.

Leibfried ML, Bavister BD. 1982. Effects of epinephrine and hypotaurine on in-vitro fertilization in the golden hamster. J ReprodFertil 66, 87-93.

Leisinger CA, Coffman EA, Coutinho da Silva MA, Forshey BS, Pinto CRF. 2014. Factors affecting in vitro maturation of alpaca (Lama paco) oocytes. Anim. Reprod. Sci. 150, 70-75.

Memeili E, First NL. 2000. Zygotic and embryonic gene expression in cow: a review of timing and mechanisms of early gene expression as compared with other species. Zigote 8, 87-97.

Miragaya MH, Chaves MG, Aguero A. 2006. Reproductive Biotchnology in south American camelids. Small Ruminant Research 61, 299-310.

Niemann H, Wrenzycki C. 2000. Alterations of expression of developmentally important genes in pre-implantation bovine embryos by in vitro culture conditions: implications for subsequent development. Theriogenology53,21-34.

Novoa C. 1970. Reproduction in camelidae (Review). J Reprod Fertil 22, 3-20.

Parrish JJ, Susko-Prurish J, Winer MA, First NL.1988. Capacitation of bovine sperm by heparin. Biol Reprod, 38,1171-1180.

Pérez MG, Apaza E, Deza H. 2006. Congelación de los espermatozoides procedentes de los conductos deferentes de camélidos. Allpaqa, Revista de Investigación del IIPC Vol. 11 Nro 01. pp 17-23, Puno-Perú.

Picha Y, Tibary A, Memon M, Kasimanickam R, Sumar J. 2013. Chronology of early embryonic development and embryo uterine migration in alpacas.Theriogenology 79, 702-708.

Ratto M, Gómez C, Berland M, Adams GP, 2007. Effect of ovarian superstimulation on COC collection and maturation in alpacas. Anim.Reprod. Sci. 97, 246–256.

Ruiz J, Landeo L, Mendoza J, Artica M, Correa JE, Silva M, Miragaya MH, RattoM.2013. Vitrification of in vitro mature alpaca oocyte: Effect ofethylene glycol concentration and time of exposure in theequilibration and vitrification solutions. Anim. Reprod. Sci. 143, 72-78.

Sanches BV, Alvares P, Hayasi J, Lopes B, Colombo MH, Gaitkoski D, Basso AC, Robert D, Seneda MM. 2016. A new direct transfer protocol for cryopreserved IVF embryos.Theriogenology 85, 1147-1151.

Sansinena MJ, Taylor SA, Taylor PJ, Schimidt EE, Denniston RS, Godke RA.In vitro production of llama (Lama glama) embryos by intracytoplasmatic sperm inyection: Effect of chemical activation treatments and culture conditions. Anim. Reprod. Sci. 99, 342-353.

Tervit HR, Whitting DG, Rowson LEA. 1972. Succesful culture in vitro of sheep and cattle ova.J ReprodFertil 30, 493–497.




DOI: http://dx.doi.org/10.18271/ria.2017.274

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